J Ethnopharmacol：基于S1P/S1PR1/PI3K/Akt信号通路研究补阳还五汤抗缺血性脑卒中作用机制

背景：缺血性脑卒中是临床常见病和多发病。近年来的研究表明，鞘脂在缺血性脑卒中的病理过程中起着重要作用。PI3K-Akt是脑缺血损伤的经典保护信号通路。S1P作用于S1P受体后，可激活下游PI3K/Akt信号通路，发挥抗脑缺血作用。补阳还五汤(BHD)是一种治疗缺血性中风的中药方剂。目前BHD基于S1P/S1PR1/PI3K/Akt信号通路在缺血性脑卒中的作用机制尚不明确。

目的：基于S1P/S1PR1/PI3K/Akt信号通路，多角度探讨BHD对缺血性卒中的作用机制。

方法：采用真空冷冻干燥法制备BHD冻干产品，采用UPLC-Q-TOF/MS法测定BHD冻干产品的化学成分。采用缝合闭塞法建立小鼠永久性大脑中动脉闭塞（pMCAO）模型。雄性KM小鼠随机分为7组：假手术组、模型组、FTY720(阳性对照)组、BHD组、BHD + W146(选择性S1PR1抑制剂)组、SEW2871(选择性S1PR1激动剂)组、毛蕊异黄酮组。

各组均连续给药14天，于第1、4、7、14天采用改良神经严重程度评分(mNSS)和脑梗死体积进行评估。采用Western blot和免疫组化(IHC)实验分别定量大鼠前额叶、海马和纹状体中SphK1、SphK2、S1PR1、PI3K、Akt和p-Akt蛋白表达。采用qRT-PCR方法检测上述组织中SphK1、SphK2和S1PR1 mRNA的表达。

结果：BHD和毛蕊异黄酮均能有效改善mNSS评分，梗死体积更小。BHD组小鼠前额叶、海马、纹状体SphK1水平明显低于模型组，海马、纹状体SphK2、PI3K、p-Akt水平明显高于模型组。BHD显著降低前额叶、海马和纹状体中SphK1 mRNA的表达，显著上调SphK2 mRNA和S1PR1 mRNA的表达。

BHD组前额叶、海马、纹状体SphK1蛋白表达水平明显低于模型组，SphK2、S1PR1、PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达水平明显升高。此外，SEW2871可上调S1PR1和Akt的表达，上调SphK2和S1PR1 mRNA的转录。BHD + W146可减弱BHD对S1P/S1PR1/PI3K/Akt信号通路相关蛋白和mRNA表达的影响。

结论：BHD与毛蕊异黄酮可显著改善pMCAO小鼠神经功能缺损症状，减小脑梗死体积，上调SphK2、S1PR1 mRNA水平，增强前额叶、海马、纹状体SphK2、S1PR1、PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达，下调SphK1 mRNA及蛋白表达，可能有助于阐明BHD通过S1P/S1PR1/PI3K/Akt信号通路保护脑缺血损伤的机制。

原始出处：

Liu W, Huang J, Zhu L, Pei D, Zhang Y. Study on the action mechanism of Buyang Huanwu Decoction against ischemic stroke based on S1P/S1PR1/PI3K/Akt signaling pathway [published online ahead of print, 2023 Apr 6]. J Ethnopharmacol. 2023;116471. doi:10.1016/j.jep.2023.116471