JNNP:脑出血后继发性损伤和炎症：患者脑组织分子标记物的系统回顾和荟萃分析

自发性脑内出血（ICH）引起的中风可导致大量死亡和残疾。ICH没有有效的特定药物治疗。脑部炎症是脑出血后潜在的治疗靶点。在啮齿类动物模型中，脑出血炎症反应的调节剂可用于改善功能结果。尽管动物模型提供了有价值的机理见解，人类和患有脑出血的啮齿类动物之间的出血诱导和出血病程 在免疫生理学方面与人体研究存在显著差异。因此为了帮助设计和选择临床试验干预措施，在实验性脑出血中测试的干预措施的好处应用于临床治疗，需要更多地了解脑出血后人类的疾病过程。为了确定脑出血的潜在治疗靶点，对脑出血后人脑组织炎症进行了系统回顾和荟萃分析，主要有三个目的：第一，确定已发表的脑出血研究报告的所有炎症分子指标；第二，与对照组相比，量化单个分子和ICH之间的联合关联；第三，与对照组相比，确定脑出血与具有类似功能的分子群之间的关联。本文发表在《神经病学，神经外科学和精神病学杂志》上（Journal of Neurology, Neurosurgery & Psychiatry）。

通过Ovid MEDLINE和Ovid Embase数据库搜索ICH患者脑组织炎症分子测量相关研究。没有对搜索应用任何语言限制，也没有使用手动搜索或灰色文献搜索。将这些搜索产生的所有记录提取到Covidence，删除重复项。研究人员独立筛选标题和摘要，以确定潜在合格研究的报告，供全文审查。本研究包括队列研究、病例对照研究和病例系列研究，这些研究报告了至少一种成人炎症的总结性分子测量。研究人员审查了每项纳入研究的参考文献，寻找可能符合条件的研究报告，并使用Google Scholar搜索可能符合条件的参考文献。 翻译人员审查了标题和摘要。排除了因潜在大血管原因、创伤或遗传性脑淀粉样血管病（CAA）引起的脑出血研究；报告出血混合病因的研究；少于5例的研究；会议摘要；以及没有报道脑炎症分子测量的研究。

用标准化形式从包含的全文中独立提取数据。对ICH病例、远离血肿的ICH病例的对照脑组织和非ICH对照组的对照脑组织提取分子表达的总结测量。从任何使用任何分子的分析技术中提取数。没有考虑CH的神经炎症的标志物，因为它的积累通常在ICH发作之前进行。独立地评估了使用病例对照研究的改进纽卡斯尔-渥太华质量评估量表。该评估为表明低偏倚风险的因素分配了分数，分数范围为0到9。修改了纽卡斯尔-渥太华质量评估量表，使用单个项目来评估病例定义和暴露的确定。对单个分子与ICH的关联进行了荟萃分析，其中两项以上的研究分析了同一分子，并报告了关联或表达的数值测量以及ICH和对照组织的SE。

总共确定了44份符合条件的研究报告，以纳入本文的叙述性综合报告 。叙述性审查中包括六个非受控病例系列，但未纳入进一步分析。其余38项病例对照研究的mNOS得分中位数为4（IQR 3-5）。这些研究报告了对20 951个分子进行21 491次分析的结果。共有21356项分析来自两项使用微阵列测量RNA转录物的研究，135项来自其余36项研究。一项微阵列研究的完整数据可从在线存储库获得。然而，另一项微阵列研究仅提供了与显著差异相关的微阵列探针相关的已发表数据，其中不包括SE的测量。相应的作者无法提供额外的数据。五项研究进行的八项分析不能指定基因符号。通过37项研究确定了其余21483项蛋白质和RNA分析的基因。在该数据集中，539个基因（35项研究中的1134项分析）接受了一次以上的分析。24项研究报告的598项分析中没有效应大小和/或SE的数值测量，因此不能用于荟萃分析。荟萃分析的最终数据集包括20850个分子的20885个分析，映射到20823个基因，并由15项研究报告。

实验流程

只有一个分子符合荟萃分析的标准。通过三项独立研究分析了白细胞介素-1β（IL-1β）蛋白。这些研究使用3,3′-二氨基联苯胺免疫组织化学（IHC）分析了脑出血手术治疗期间获得的脑组织中IL-1β的丰度。作为对照样本，两项研究使用了非出血性、非恶性疾病手术切除的脑组织，其边缘距血肿边界至少1 cm。在mNOS偏倚风险评估中，对其中两项研究的得分为423 24分，另一项研究的得分为522分，最高为9分。使用随机效应荟萃分析对127名患者和41名对照组的研究所描述的相关性进行汇总，结果显示ICH后IL-1β表达增加具有统计学意义的相关性（SMDc 1.74，95%可信区间0.28至3.21；p=0.036；I2=46%；）。所有研究报告了在脑出血发病后<6小时和>6小时接受手术的患者亚组。在<6小时时，IL-1β与ICH之间没有统计学意义的相关性（SMDc 2.44，95%可信区间）−2.76至7.64；p=0.18；I2=88%；），而在脑出血发病后>6小时，与对照组织相比，IL-1β与脑出血相关（SMDc 2.31，95%可信区间0.15至4.47；p=0.044；I2=70%；）。漏斗图分析未显示发表偏倚的证据。尽管它们不符合荟萃分析的标准，但其他四项纳入研究报告了IL-1βmRNA的分析。

文献弦图

其他分子通过多项研究进行分析，但不符合荟萃分析标准。五项研究对NF-κB复合物的亚单位进行了10次分析，测量了mRNA和蛋白质的丰度。六种mRNA分析中有五种是通过微阵列进行的，与对照组织相比，发现与脑出血的NFKB1、NFKB2、REL、REL或RELB亚单位无关。然而，通过半定量逆转录PCR（RT-PCR）对NFKB1 mRNA进行假设驱动分析，与对照组织相比，IHC和WB检测的或RELA和多聚体NF-κB复合物蛋白与ICH呈正相关。肿瘤坏死因子（TNF）-α通过六项研究进行八项分析。一项微阵列分析发现TNF与ICH无关联，而其他使用RT-PCR、定量RT-PCR的分析发现，与对照组织相比，TNF与ICH组织呈正相关。11项研究使用末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记（TUNEL）来识别与凋亡相关的双链DNA断裂，所有这些研究都确定ICH后双链DNA断裂增加.

IL-1β蛋白与脑出血合并独立相关性的森林图

在脑出血后6小时以上IL-1β蛋白增加的初步发现得到了实验研究的支持，实验研究表明出血诱导的啮齿动物脑IL-1β表达与更差的功能结果相关。 因为人类脑出血模型和实验性脑出血模型之间存在显著差异，白细胞介素-1受体拮抗剂是正在进行的ICH治疗II期试验的对象，ICH和IL-1β表达之间的一致关联支持IL-1β途径调节剂在ICH治疗中的优先顺序。对GO富集的二次分析显示了人类ICH后可能被激活或抑制的生物过程。在ICH后增加的大量基因中，与中性粒细胞脱颗粒和细胞凋亡负调控相关的GO术语丰富。这表明，脑出血后中性粒细胞在人脑中积聚，并得到了脑出血啮齿动物模型研究的支持，其中中性粒细胞的快速积聚导致血脑屏障功能障碍和神经元损伤。从脑出血患者排出的血肿中获得的中性粒细胞表现出促炎基因的诱导，包括IL-1β。36外周血中性粒细胞计数增加与ICH后3个月的功能结果较差相关。11项研究发现，与对照组织相比，ICH后TUNEL信号增加，表明ICH后凋亡增加。

总之，白细胞介素-1β途径调节剂可优化ICH的炎症反应，并在临床试验中进行值得进行实验。