专访：无关NgAgo，韩春雨时隔6年再发论文

近日，河北科技大学基因编辑研究中心副教授韩春雨以通讯作者身份在Oxford academic旗下期刊Nucleic Acids Research （《核酸研究》，IF=16.971）上发表其最新成果，该论文报道了一种新的在活细胞内示踪核糖核酸（RNA）的工具。

自2016年5月发表新基因编辑技术NgAgo论文后，韩春雨本人历经科学质疑、论文撤稿、调查处理等种种争议性事件。

沉寂数年后，韩春雨的最新动作再次引发关注。1月26日，《中国科学报》对其进行了采访。

据韩春雨介绍，“最新发表的这项研究和NgAgo没有关联，但也是新技术开发，或者说工具的研究发明。”他表示，“过去六年，我们一直在做工具的开发，Ago相关的工具我们也一直在做。”

《中国科学报》注意到，最新论文通讯单位为“河北科技大学基因编辑研究中心”。韩春雨解释：“这个中心是NgAgo研究论文之后成立的，我也是在争议之后到中心工作，目前是副教授。”

韩春雨引发的巨大争议始于6年前。

2016年5月，国际学术期刊《自然—生物技术》（Nature Biotechnology）发表韩春雨团队新的基因编辑技术NgAgo，在国内某网红科学家推手的鼓噪下，被媒体以“甘坐冷板凳、十年憋大招”的故事原型炒作而走红。随后，国内外多名基因编辑领域科学家实名发声，称实验结果难以重复，怀疑实验结果的真实性。

2017年8月，《自然—生物技术》发表题为《是该数据说话的时候了》社论，文中宣布韩春雨团队已撤回该论文。

2018年9月，河北科技大学通报对韩春雨团队撤稿论文的调查结果，认为撤稿论文已不再具备重新发表的基础，未发现韩春雨团队有主观造假情况。

本次采访中，《中国科学报》质疑当年如何得到“没有主观造假”的调查结果，韩春雨表示“不再解释”。“学校考虑到涉及学术，放在公众面前可能反而会引起一些误解，让我不要再去说了。”他说。

在这篇题为“A Cas6-based RNA tracking platform functioning in a fluorescence-activation mode”的最新论文中，作者写道：“这种基于蛋白Cas6‘分子开关’的RNA示踪平台具有高敏感性和高特异性。”

RNA在细胞内扮演着重要角色，已经是生物学上不争的事实。为此，科学家们致力于在活细胞内“看”到RNA的分布以及追踪RNA的活动，试图用一些分子与其结合能够发出荧光，从而“点亮”RNA。

不过，道理虽然简单，实现起来却没有那么容易。据韩春雨介绍，目前，学界用荧光示踪活细胞RNA有两种方法，荧光富集（FE）型和荧光激活（FA）型。

“富集型例如最新的Cas9或者Cas13工具具有启发性，研究它们的文章都发表在很好的刊物上，但存在背景高、分子量巨大等问题，并不好用。”韩春雨表示，而激活型例如基于MCP-PCP的荧光互补激发RNA示踪工具则需要在靶RNA上连接非常长的“反应原件”附加片段，附加片段甚至远远大于想要看到的靶RNA本身，因此增加了产生假相的可能。

韩春雨表示，其团队一直在尝试开发更好用的RNA示踪技术。近年来，一些“CRISPR/Cas6蛋白与RNA上的Cas6结合位点（CBS）相互作用”的相关研究引发其团队的关注。

韩春雨表示，其团队注意到Cas6结合CBS可能产生结构变化这一特点，设计出“点亮”荧光蛋白的RNA示踪工具。具体来说，Cas6与split-Venus片段（被一分为二的荧光蛋白）构建成一个新的嵌合体示踪蛋白，这个蛋白平时不会发光，只有与目标RNA结合时才会发出荧光。因此，他们将其命名为基于Cas6的荧光互补平台（Cas6FC）。

简单地说，利用这一平台，只需要在感兴趣的RNA上标记上一个反应原件，就能“打开”Cas6FC荧光开关，从而“点亮”RNA。

论文称，Cas6FC可以解决此前平台面临的高背景噪音的困难。“在活细胞中，Cas6FC可以检测目标RNA而几乎没有背景噪声。” 

对于最新研究，韩春雨称“我们是有信心的”。他表示，“重复性是不成问题的，目前，已经有一些比我们还小的实验室在和我们合作，有一些反馈，这个工具是可以直接拿去用的，并且是好用的。”

韩春雨同时承认，新发表论文的实验做得“还不丰满”。“论文还是重在机理、原理，一些实操性的实验还没有做完整。”他表示，原因在于“人员、经费和设备的限制。”

《中国科学报》看到，论文在“经费”一栏中标注了“河北省重点研发计划（19272403D）”一项资助。论文共有5名作者，其中第一作者为高峰，通讯作者为韩春雨。作者中还包括河北科技大学的Zheng Ke、Jiang Feng以及主要负责荧光原位杂交技术的河北大学基础医学院的Li You Bo。

韩春雨曾于2019年5月在bioRxiv预印本网站上提交了关于示踪RNA新平台的初步文章，正文不足500字，未经同行评议。预印本文章将新平台命名为“VN-dCasE-VC”，结论是“dCasE蛋白更适合用于活细胞的RNA追踪”。两年后的2021年2月，他们形成正式文章投稿《核酸研究》，12月完成修回、编辑确认，最终于2022年1月初接收。

此外，韩春雨透露，他们正在开展Ago有关的科研工作，近期会发表一些研究成果。

论文信息：

https://doi.org/10.1093/nar/gkac014

https://doi.org/10.1101/635912