J Cell Sci:科研人员拓宽了GBP-GFP系统的应用
2017-03-21 厦门大学细胞应激生物学国家重点实验室 厦门大学细胞应激生物学国家重点实验室
近日,厦门大学靳全文教授课题组在国际学术期刊《Journal of Cell Science》发表了题为《Facile manipulation of protein localization in fission yeast through binding of GFP-binding protein to GFP》的研究论文。GFP结合蛋白(GFP binding protein, GBP)是
近日,厦门大学靳全文教授课题组在国际学术期刊《Journal of Cell Science》发表了题为《Facile manipulation of protein localization in fission yeast through binding of GFP-binding protein to GFP》的研究论文。
GFP结合蛋白(GFP binding protein, GBP)是由美洲鸵单链抗体改造而得到的,对GFP有较高亲和性。在多种生物实验体系中,人们已经开始利用GBP富集带有GFP标签的蛋白,十分有效。GBP的分子质量较小,只有13 kDa,这有效地降低了对与之融合的蛋白功能的影响。通过GBP与GFP的高亲和力,可以有效地将目的蛋白强制定位到细胞特定的区域,人为改变或操控目的蛋白在细胞内的定位,帮助对目的基因的功能研究。
为了拓宽GBP-GFP系统在模式生物裂殖酵母中的应用,研究人员构建了一系列带有不同类型及不同强度启动子的质粒共计30个,可以用于整合到酵母基因组内表达融合了GBP或者GBP-mChery的目的蛋白。
在这项研究中,研究人员通过给纺锤体检验点蛋白Dma1及细胞胞质分裂起始网络激酶Cdc7添加GBP或者GBP-mChery标签,验证了所构建的质粒的有效性。通过GBP-GFP系统,Dma1可有效地被分别强制定位到细胞核膜、核基质、核仁、细胞端部以及胞质分裂环的结点。而通过Sid4-GFP将Cdc7-GBP提早募集到纺锤体极体SPB上时, 细胞胞质分裂信号通路被提前激活,细胞出现严重多隔和致死效应。这些结果显示,GBP/GBP-mChery标记的蛋白可以有效地被GFP标记的蛋白牵拉,这将方便人们对目的基因在特定细胞内区域的功能的研究。
原始出处:
Chen YH, Wang GY, Hao HC,et al.Facile manipulation of protein localization in fission yeast through binding of GFP-binding protein to GFP.J Cell Sci. 2017 Mar 1
作者:厦门大学细胞应激生物学国家重点实验室
版权声明:
本网站所有注明“来源:梅斯医学”或“来源:MedSci原创”的文字、图片和音视频资料,版权均属于梅斯医学所有。非经授权,任何媒体、网站或个人不得转载,授权转载时须注明“来源:梅斯医学”。其它来源的文章系转载文章,本网所有转载文章系出于传递更多信息之目的,转载内容不代表本站立场。不希望被转载的媒体或个人可与我们联系,我们将立即进行删除处理。
在此留言
小提示:本篇资讯需要登录阅读,点击跳转登录
#Cell#
60
#科研人员#
79
#CEL#
83
学习了
100