Haematologica：CD9在儿童B细胞前体急性淋巴细胞白血病（BCP-ALL）中能能增强糖皮质激素敏感性

急性淋巴细胞白血病（ALL）是儿童最常见的血液恶性肿瘤，约占儿童癌症的四分之一。尽管在多数发达国家ALL生存率已超过85%，但耐药性的出现使复发患儿的预后仍然不容乐观。糖皮质激素（GCs）是儿童ALL缓解诱导的核心药物，包括泼尼松（Pred）和地塞米松（Dex）。虽然临床前研究已报道多种ALL对GCs耐药的机制，但进一步探索GC耐药的新机制仍然紧迫。

近日，Kam Tong Leung 团队在 Haematologica 上发表题为 CD9 shapes glucocorticoid sensitivity in pediatric B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia 的文章，揭示CD9在儿童B细胞前体急性淋巴细胞白血病（BCP-ALL）中的新功能，特别是在调节糖皮质激素（GC）敏感性方面的关键作用。通过一系列体外实验、临床分析和机制探索，该研究不仅确立了CD9作为预测GC治疗反应的有价值生物标志物，还为克服GC耐药性提供了新的见解和潜在的治疗策略。

研究首先通过体外药物敏感性分析揭示了CD9表达与糖皮质激素敏感性之间的密切关系。发现CD9高表达（CD9high）的细胞系对糖皮质激素（泼尼松和地塞米松）高度敏感，而CD9低表达（CD9low）的细胞系则表现出耐药。这一结果在18个诊断为BCP-ALL的患者原代细胞中得到进一步验证，其中CD9+淋巴母细胞对泼尼松和地塞米松的敏感性显著高于CD9-病例。

为了验证这一发现的临床相关性，研究团队对182名接受7天泼尼松预处理并随后进行多药化疗的儿童BCP-ALL患者进行了回顾性分析。结果显示，CD9阴性与泼尼松反应不佳显著相关。具体而言，19.4%的CD9-患者表现出较差的泼尼松反应，而CD9+患者中这一比例仅为6.2%（P=0.02）。值得注意的是，泼尼松反应不佳且为CD9-表型的患者中，年龄较大、男性、白细胞计数较高以及BCR-ABL1易位的比例显著增加。多变量分析进一步确认，CD9阴性是泼尼松反应不佳的独立预测因素。

CD9低表达的BCP-ALL细胞对糖皮质激素表现出更强的耐药性

为了从功能水平验证CD9与GC敏感性的关联，Kam团队采用了功能获得和功能丧失的方法。在CD9low细胞中过表达CD9显著提高了对泼尼松和地塞米松的敏感性，而在CD9high细胞中敲除CD9显著降低了对这些药物的敏感性。这些发现强调了CD9在调节BCP-ALL细胞对糖皮质激素敏感性中的重要作用，表明CD9表达可作为预测患者对糖皮质激素治疗反应的有价值生物标志物。

进一步探索CD9调节GC敏感性的机制时，研究人员发现尽管CD9与糖皮质激素受体（NR3C1）存在物理相互作用，但CD9并不影响NR3C1的表达、磷酸化或细胞核转位。CD9high和CD9low细胞系中NR3C1蛋白均有广泛表达，且在患者样本中CD9+和CD9-之间的NR3C1蛋白表达也无显著差异。此外，NR3C1 mRNA表达在CD9+和CD9-病例之间无差异，且不与CD9 mRNA水平相关。GC诱导的NR3C1磷酸化在CD9low和CD9high细胞中均能正常进行，NR3C1在GC刺激下的细胞质-细胞核转位在对照和CD9过表达细胞中均表现良好。这意味着CD9与NR3C1相互作用，但不影响其基本功能动态，表明CD9可能通过其他机制影响GC敏感性。

为进一步识别与GC敏感性相关的下游基因特征，研究团队进行了RNA测序。结果显示，CD9high细胞中差异表达基因（DEGs）数量更多（110 vs. 82）。尤其是三个已知的GC响应基因（ZBTB16、TSC22D3和BCL2L11），这些基因在CD9high细胞中的诱导程度显著更高。这意味着CD9增强了GC响应基因的转录，尽管NR3C1的核转位正常，CD9high细胞表现出更强的GC诱导基因转录活性。

尽管CD9与糖皮质激素受体NR3C1有结合作用，但这种结合并不影响NR3C1的表达、磷酸化过程或其向细胞核的转位

考虑到之前研究表明MAPK通路的持续激活与糖皮质激素耐药性相关，Kam团队进一步探索了MEK抑制剂trametinib与GCs在CD9+和CD9- BCP-ALL细胞中的协同作用。他们在体外细胞实验和动物模型中发现，trametinib在CD9low细胞中与GCs表现出强协同作用（联合治疗显著减少了白血病负荷），而在CD9high细胞中却表现为拮抗作用。进一步研究发现，CD9high细胞可能通过STAT通路的补偿性激活逃避这种联合治疗，这一发现表明加入JAK抑制剂如Ruxolitinib可能对CD9high病例具有潜在益处。

总的来说，该研究揭示了CD9对儿童急性淋巴细胞白血病（BCP-ALL）的新功能，并提供了克服GC耐药性的新见解。具体而言：

1. CD9在调节糖皮质激素敏感性中的作用：研究发现CD9在调节BCP-ALL细胞对糖皮质激素的敏感性中起重要作用。CD9高表达与GC高敏感性相关，而CD9低表达则与GC耐药性相关。
2. CD9调节GC敏感性的分子机制：尽管CD9与糖皮质激素受体（NR3C1）存在物理相互作用，但研究发现CD9并不直接影响NR3C1的表达、磷酸化或细胞核转位。相反，CD9通过增强GC响应基因的转录来调节GC敏感性。这一发现为理解CD9如何影响GC敏感性提供了新的视角。
3. CD9表达与MEK抑制剂Trametinib的协同作用：研究结果显示，CD9表达水平影响MEK抑制剂Trametinib与糖皮质激素的协同效果。在CD9低表达细胞中，Trametinib与GCs表现出强协同作用，而在CD9高表达细胞中则表现为拮抗作用。这一发现为基于CD9表达水平设计个性化治疗方案提供了新思路。
4. 潜在的治疗策略：研究发现CD9高表达细胞可能通过STAT通路的补偿性激活逃避Trametinib和GCs的联合治疗，提示加入JAK抑制剂如Ruxolitinib可能对CD9高表达病例具有潜在益处。

这些研究成果不仅深化了我们对BCP-ALL分子机制的理解，也为个性化治疗方案的设计提供了理论基础。通过在治疗方案中结合MEK抑制剂和JAK抑制剂，可能提高对GCs耐药的BCP-ALL患者的治疗效果。这些发现为克服儿童急性淋巴细胞白血病治疗中的GC耐药性提供了新的见解，具有重要的临床应用前景。

原始出处：

Zhang C, Chan KYY, Ng WH, Cheung JTK, Sun Q, Wang H, Chung PY, Cheng FWT, Leung AWK, Zhang XB, Lee PY, Fok SP, Lin G, Poon ENY, Feng JH, Tang YL, Luo XQ, Huang LB, Kang W, Tang PMK, Huang J, Chen C, Dong J, Mejstrikova E, Cai J, Liu Y, Shen S, Yang JJ, Yuen PMP, Li CK, Leung KT.CD9 shapes glucocorticoid sensitivity in pediatric B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia.Haematologica. 2024 Apr 4. doi: 10.3324/haematol.2023.282952.